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2019考研临床医学综合能力(西医)考试解析:生物化学部分第三讲

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时间2018-11-03 14:08:49

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2019考研临床医学考研大纲已经公布,下面是新文道老师杨净为考生带来的解析:生物化学部分第三讲!

第一章 蛋白质的结构及功能

第四节 蛋白质的理化性质

一、蛋白质的分离纯化

1.透析 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。

2.超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液的目的。

3.丙酮沉淀 必须在0~4℃低温下进行,丙酮的体积10倍于蛋白质溶液体积;蛋白质沉淀后应迅速分离,否则将发生变性。也可使用乙醇沉淀。

4.盐析 硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐放入蛋白质溶液中,破坏水化膜并中和表面电荷,导致蛋白质胶体的稳定因素去除而沉淀(一般无蛋白质的变性)。各种蛋白质盐析时所需盐浓度和pH值均不同。(2011A25)

5.免疫沉淀法 利用特异抗体识别相应的抗原蛋白,形成抗原抗体复合物,从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。

6.电泳 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中,受到电场力的作用向正极或负极泳动。注:聚丙烯酰胺凝胶电泳时,蛋白质的泳动速度取决于蛋白质的分子量、分子形状、溶液的PH值、溶液的离子强度。(1993X135)

7.层析 待分离蛋白质溶液(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离的蛋白质在两相中反复分配,并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。注:凝胶过滤又称分子筛层析。层析柱内填满带有小孔的颗粒,一般由葡聚糖制成。蛋白质溶液加与柱之顶部,任其往下渗漏,小分子蛋白质进入孔内,因而在柱中滞留时间较长,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出,因此不同大小的蛋白质得以分离。(1993A20、2000A20)

8.超速离心法 既可以用来分离纯化蛋白质,也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关。

注:Sanger当年用二硝基氟苯与多肽链的α-氨基作用生成二硝基苯氨基酸,然后将多肽水解,分离出带有二硝基苯基的氨基酸。目前多用丹磺酰氨使之生成丹酰衍生物,该物质具有强烈荧光,更易鉴别。(2001A20)

根据分子量大小分离纯化:透析、超滤、凝胶过滤。

根据电荷不同分离纯化:电泳、离子交换层析。

根据沉淀和溶解度的不同(破坏水化膜)分离纯化:丙酮沉淀、盐析、免疫沉淀法。

高分必备

蛋白质变性后——溶液黏度增加、溶解度降低、结晶能力消失、生物活性丧失,易被蛋白酶水解。(联想一下煮鸡蛋)。

DNA变性后——溶液黏度降低、DNA在260nm处的吸光度增加(增色效应)。

蛋白质变性后空间构象被破坏,但一级结构不受影响,部分蛋白质变性后可以复性。

蛋白质水解时,一级结构被破坏,所有蛋白质水解后均不能复性。

分子筛层析——小的流不出,大的下的快。

以上就是新文道考研小编为2019考研西综考生整理的“2019考研临床医学综合能力(西医)考试解析:生物化学部分第三讲!相关内容,希望对大家有所帮助!

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