2019考研临床医学综合能力(西医)考试解析：生物化学部分第三讲

2019考研临床医学考研大纲已经公布，下面是新文道老师杨净为考生带来的解析：生物化学部分第三讲!

第一章 蛋白质的结构及功能

第四节 蛋白质的理化性质

一、蛋白质的分离纯化

1.透析 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。

2.超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。

3.丙酮沉淀 必须在0～4℃低温下进行，丙酮的体积10倍于蛋白质溶液体积;蛋白质沉淀后应迅速分离，否则将发生变性。也可使用乙醇沉淀。

4.盐析 硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐放入蛋白质溶液中，破坏水化膜并中和表面电荷，导致蛋白质胶体的稳定因素去除而沉淀(一般无蛋白质的变性)。各种蛋白质盐析时所需盐浓度和pH值均不同。(2011A25)

5.免疫沉淀法 利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，形成抗原抗体复合物，从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。

6.电泳 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中，受到电场力的作用向正极或负极泳动。注：聚丙烯酰胺凝胶电泳时，蛋白质的泳动速度取决于蛋白质的分子量、分子形状、溶液的PH值、溶液的离子强度。(1993X135)

7.层析 待分离蛋白质溶液(流动相)经过一个固态物质(固定相)时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。注：凝胶过滤又称分子筛层析。层析柱内填满带有小孔的颗粒，一般由葡聚糖制成。蛋白质溶液加与柱之顶部，任其往下渗漏，小分子蛋白质进入孔内，因而在柱中滞留时间较长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出，因此不同大小的蛋白质得以分离。(1993A20、2000A20)

8.超速离心法 既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数表示，沉降系数与蛋白质的密度和形状相关。

注：Sanger当年用二硝基氟苯与多肽链的α-氨基作用生成二硝基苯氨基酸，然后将多肽水解，分离出带有二硝基苯基的氨基酸。目前多用丹磺酰氨使之生成丹酰衍生物，该物质具有强烈荧光，更易鉴别。(2001A20)

根据分子量大小分离纯化：透析、超滤、凝胶过滤。

根据电荷不同分离纯化：电泳、离子交换层析。

根据沉淀和溶解度的不同(破坏水化膜)分离纯化：丙酮沉淀、盐析、免疫沉淀法。

高分必备

蛋白质变性后——溶液黏度增加､溶解度降低､结晶能力消失､生物活性丧失，易被蛋白酶水解｡(联想一下煮鸡蛋)。

DNA变性后——溶液黏度降低､DNA在260nm处的吸光度增加(增色效应)。

蛋白质变性后空间构象被破坏，但一级结构不受影响，部分蛋白质变性后可以复性。

蛋白质水解时，一级结构被破坏，所有蛋白质水解后均不能复性。

分子筛层析——小的流不出，大的下的快。

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